FlowCellect ケモカイン受容体 CXCR3 発現定量キット

FlowCellect ケモカイン受容体 CXCR3 発現定量キット

FlowCellect

ミリポアのFlowCellect™ GPCR発現定量キットは、より簡単且つ効率的に、目的とする細胞種におけるGPCRの発現特性を解析するよう設計されています。本キットには、最適化されたバッファー及び当該のGPCRターゲットを検出する能力を有する高親和性の特異的抗体が同梱されています。また、ネイティブ細胞における内因性のGPCR発現レベルの測定に理想的な蛍光色素としてRフィコエリスリンをコンジュゲートした二次抗体も含まれています。添付のプロトコルに従ってアッセイを行うことで、二次アッセイの実施に最適なネイティブ細胞株を簡単に同定することができます。これにより、構造活性相関解析による創薬への取り組みが推進されます。

その他の試験アプリケーションとして、クローンを選択する過程で、細胞培養における高中低の発現レベルを同定する際にも本キットをご利用頂けます。研究者の皆様が安定細胞株をご自身の研究室で作製する場合、選択したクローンが、薬剤スクリーニングの実施に必要なGPCRを細胞表面に確実に発現していることが重要です。不適切なクローンを選択してしまうと、親和性の低い化合物を検出できず、一次スクリーニングに悪影響を及ぼします。これは、ヒット率の低下につながり、ブロックバスターとなり得る化合物を同定する際に、スクリーニングの限界の要因となる可能性があります。

また本キットにはミリポアのChemiScreen™ GPCR細胞株のバイアルが2本入っており、アッセイコントロールとして機能します。特許取得済みの技術を使用したミリポアのChemiScreen™ GPCR細胞株は、ネイティブ細胞と比較して最大結合部位数（Bmax値）が高く、細胞表面において高レベルの発現を維持します。

ミリポアのFlowCellect™ ケモカイン受容体発現定量キットをご利用頂くことで、生物学的アッセイを開発する際に、GPCRを発現するネイティブ細胞を同定することが可能になります。これらのGPCRの安定なクローン細胞株を簡単に選択できれば、疾患状態において起こる受容体の発現レベルの変化をモニターすることが可能となります。

FlowCellect™ GPCR発現定量キットは、フローサイトメトリーのアプリケーション用に設計されており、あらゆる細胞表面におけるGPCRの発現レベルの同定及び定量化にご利用頂けます。本キットでは、フローサイトメトリー用にバリデートされたGPCR抗体を使用し、受容体の発現を検出します。また、定量化を行うため、受容体の発現レベルが十分に解析された陽性コントロール細胞と陰性コントロール細胞も含まれています。

ケモカイン受容体は、免疫細胞において高度に発現し、白血球の活性化と遊走を調節することから、非常に魅力的なターゲットです。これらのターゲットのほとんどが、HIV感染、関節リウマチ、糖尿病といった特定の疾患状態において重要な役割を果たすことが明らかになっています。多くの場合、これらの受容体の発現レベルにより、感染症や炎症など種々の疾患状態がわかります。

ケモカイン受容体は、7回膜貫通型Gタンパク質共役受容体（GPCR）です。ケモカイン受容体ファミリーは、18種類のGPCRターゲットから構成され、うち10種類はCCケモカイン受容体、7種類はCXCケモカイン受容体、1種類はCX3Cケモカイン受容体です。現在ミリポアでは、ケモカイン受容体ファミリーの内、12種類にフォーカスしてGPCR発現定量キットを提供致しております。

CXCR3は、CXCケモカインIP10、I-TAC、MIGに選択性を持つ7回膜貫通型Gタンパク質共役受容体です [1]。IP-10及びMIGがCXCR3に結合すると、Ca2+の動員、Tリンパ球の走化性及び炎症反応が誘発されます。また、血管新生の有力な阻害剤としても機能します。CXCR3は、in vitroでIL-2により活性化されたTリンパ球[1]、及び、リウマチ性関節炎や多発性硬化症において炎症を起こした組織に存在するTリンパ球[2、3]で高度に発現します。In vivoにおいて、CXCR3を中和すると、実験的に誘発した1型糖尿病[4]、腹膜炎[5]、肺移植後の閉塞性細気管支炎症候群[6]を阻害します。

キットに含まれるコントロール細胞は、ミリポアが提供するChemiScreen™ GPCR安定細胞株をもとにしています。陽性及び陰性の両コントロール細胞株は、各細胞種の受容体数を判定するため、放射性リガンド結合アッセイなどの薬理学的技術を利用して確認されています[7]。この情報を利用して、どの細胞種においても1細胞あたりの受容体数を判定することが可能となります。

フローサイトメトリー

Human

• 製品のカタログまたは、製品に添付されている弊社発行の資料で特に明記されない限り、弊社の製品は、研究用途のみを目的としており、その他のいかなる目的（無断での商業目的の使用、in vitro診断への使用、ex vivoまたはin vivo治療への使用、あるいは、ヒトまたは動物へのいかなる使用及び適用を含むが、これに限らない）のために使用することはできません。
• Alexa Fluor® は、Molecular Probes, Inc.の登録商標です。

すべてのキット内容についてロット間の工程内試験を実施

ケモカインキット

Drug Screening

• シグナル伝達
• ケモカイン解析

• 1.500×マウス抗ヒトCXCR3モノクローナル抗体
  クローンID 49801.11:–(Part No. CS202140) 1バイアル20 μL入り
• 2.500×Rフィコエリスリンコンジュゲート二次抗体: - (Part No. CS202129) 1バイアル20 μL入り
• 3.抗体希釈液: - (Part No. CS202130) 1バイアル1 mL入り
• 4.固定化バッファー：(Part No. CS202122) 1ボトル10 mL入り
• 5.10×洗浄バッファー：(Part No. CS202123) 1ボトル13 mL入り
• 6.5×アッセイバッファー：(Part No. CS202124) 1ボトル55 mL入り
• 7.CXCR3の陽性コントロール細胞培養：- (Part No. CS202390) 1バイアル（4×106細胞）
• 8.CXCR3の陰性コントロール細胞培養：- (Part No. CS202121) 1バイアル（4×106細胞）

抗体及びバッファーは4–8 ℃
陽性・陰性コントロール細胞は－80 ℃
6ヶ月間

Mouse

¹²⁵I

Flow Cellect

ExpressPro

Monoclonal Antibody

研究