Millipore - 96ウェルプラスミド精製キット

モンタージュプラスミドミニプレップ₉₆キット

キットには96ウエルフォーマットでプラスミドDNAを精製するために必要な全ての試薬および消耗品が含まれています。溶菌後に3回の短いろ過操作だけで、プレート上で96検体の精製DNA試料を調製できます。精製した試料は、クローニング、DNAシークエンシング、形質転換やその他の高感度なダウンストリームアプリケーションの大半に適しています。

モンタージュプラスミドミニプレップ₉₆キットは、自動分注システムでの使用に適しています。プレート上部からの精製試料の回収と遠心ステップが無いことにより、このキットは広範なオートメーションシステムに対応可能です。

遠心も沈殿ステップも不要
短い処理時間
優れた純度、収率および再現性
自動化対応

キット構成品

部品	機能
96ウェルディープウエル培養ブロック	宿主菌の増殖
プラスミドプレート	プラスミドDNAの精製
ライセートクリアリングプレート	バクテリアライセートの粗ろ過
V-bottom保存プレート	プラスミドDNA試料の保存
シーリングテープ	V-bottom保存プレートの密封
RNase A	Solution 1への添加用
Solution 1	菌の再懸濁
Solution 2	溶菌
Solution 3	中和
Solution 4	洗浄
Solution 5	プラスミドDNAの再懸濁/保存
Foil seal	Sealing plates during growth (must be pierced)
* キットの構成品に関しての詳細は、モンタージュプラスミドミニプレップ₉₆キットの取扱説明書をご覧いただくか、http://www.millipore.com/userguides.nsf/docs/p36315にアクセスください。

プロトコール

For BAC DNA protocol, see Montage Plasmid Miniprep_HTS Kit user guide, P36315

1.	溶菌の後、ライセートをディープウエル培養ブロックからクリアリングプレートに移します。吸引ろ過を用い、プラスミドフィルタープレート中にライセートを回収します。
2.	試料を濃縮するために、プラスミドプレートをマニホールドの上に置き、5から7分間吸引します。プラスミドDNAはメンブレン上に捕捉され、一方、不純物を含むろ液は廃棄します。洗浄溶液を添加し、3から5分間吸引ろ過します。
3.	再懸濁バッファーを添加し、精製された試料をピペットで回収します。
4.	試料を保存用のV-bottomプレートに移します。

性能

高いクォリティ

モンタージュプラスミドミニプレップ₉₆キットを用いて精製したプラスミドDNAのクォリティと均一性を示すアガロースゲル電気泳動結果(MW-lambda Hind III digest)。

高い収量*
宿主菌株	プラスミド	収量 (µg)
XL 1-blue	pUC 19	2.6 ± 0.5
XL 1-blue	pLH2*	3.9 ± 0.4
JM109	pUC 19	2.7 ± 0.3
JM109	pLH2*	3.9 ± 0.4
* 結果は、宿主菌株、プラスミド、プロトコール条件に依存して変化します。 ** pLH2は、pUC19にλファージHind III切断断片2.0kbpをクローニングしたもの。サイズは4.7kbp

信頼性の高い結果
宿主菌株	プラスミド	平均解析長 (n=24; >98% accuracy)	平均Phred q >20 ベース (n = 24)
XL1-blue	pUC 19	707	618
XL1-blue	pLH2	658	623
JM109	pUC 19	706	602
JM109	pLH2	695	543
モンタージュプラスミドミニプレップ₉₆キットで調製したプラスミドを用いたシークエンスデータ。試料は全て、BigDye®試薬を用いて反応させ、MegaBACE®キャピラリーアレイシークエンサーで解析した。pLH2 160 ng、pUC19 100 ngをテンプレートに用いた。反応物はモンタージュ SEQ₃₈₄を用いて精製した。

Performance— BAC DNA

High Speed and High Performance
Prep Time	56 minutes
Average Yield (µg/well)	0.86 (± 0.28)
Average Phred 20 bases	411 (± 152)
Pass Rate (% wells with >100 Phred 20 bases)	90
Data were generated with 96 BAC clones (human chromosome 22 library, plate #4, Research Genetics, Inc.). BAC DNA was isolated from the 96 clones with the Montage Plasmid Miniprep_HTS 96 Kit. Prep time starts with pelleted bacterial cells prior to lysis, and includes DNA resuspension time. DNA yield was measured in a fluorometric assay using SYBR® green I nucleic acid stain (Molecular Probes, Inc.). The DNA preps were sequenced using an optimized BigDye® version 3.0 (Applied Biosystems, Inc.) sequencing reaction setup and cycling conditions. Sequencing reactions were cleaned on Montage SEQ₃₈₄ plates prior to injection on the ABI 3700 DNA sequencer. Pass rate is defined as the percentage of the 96 clones that yielded at least 100 Phred 20 bases.

BAC DNA purified with the Montage Plasmid Miniprep_HTS 96 Kit was dissolved in 35 µL of the kit's Resuspension Buffer (solution 5) and 10 µL of the DNA were used for sequencing in a BigDye version 3.0 sequencing reaction (3/8 scale) as described in the kit's optimized protocol. The sequencing reaction was cleaned up using Montage SEQ₃₈₄ plate and injected onto the ABI 3700 capillary sequencer.

Chromosomal DNA

DNA from three different BAC clones from a human chromosome 22 human BAC DNA library (Research Genetics, Inc.) was purified with the Montage Plasmid Miniprep_HTS 96 Kit and electrophoresed on a 0.8% agarose gel for 120 min at 100 V either uncut (lanes 1 – 3) or after digestion with Not I (lanes 4 – 6) or Hind III (lanes 7 – 9). Lane M is a Hind III digest of Lambda phage DNA. The BAC DNA purified with the Montage Plasmid Miniprep_HTS 96 Kit is suitable for fingerprinting.

比較	カタログ番号	概要	数量/箱
	LSKP09604	モンタージュプラスミドミニプレップ_HTS 96 Kit	4	» カートに入れる
	LSKP09624	モンタージュプラスミドミニプレップ_HTS 96 Kit	24	» カートに入れる

比較	カタログ番号	概要	数量/箱
	LSKCCB050	細胞培養ブロックフタ付	50	» カートに入れる
	LSKP38450	384ウェルプラスミドミニプレップクリアリングプレート	50	» カートに入れる
	SCGVU01RE	ステリカップ-GV , 0.22 µm, PVDF, 150 mL, 放射線滅菌済	12	» カートに入れる
	LSKAST100	粘着テープカバー	100	» カートに入れる

比較	カタログ番号	概要	数量/箱
	MSVMHTS00	マルチスクリーン_HTS バキュームマニホールド	1	» カートに入れる
	LSKVBP100	V-ボトムプレート	100	» カートに入れる
	WP6111560	Chemical Duty Pump, 115 V/60 Hz	1	» カートに入れる
	WP6122050	Chemical Duty Pump, 220 V/50 Hz	1	» カートに入れる
	WP6110060	吸引加圧両用Chemical Dutyポンプ, 100 V/50–60 Hz	1	» カートに入れる

比較	カタログ番号	概要	容量、mL
	LSKCRS500	菌再懸濁溶液 0.5 L	500	» カートに入れる
	LSKCLS500	溶菌溶液 0.5 L	500	» カートに入れる
	LSKNS0500	中和溶液, 0.5 L	500	» カートに入れる
	LSKNF0500	ヌクレアーゼフリー水, 0.5 L	500	» カートに入れる
	LSKCTB500	Trisバッファー, 0.5 L	500	» カートに入れる
	LSKPMRN30	RNase A, 0.9 mL	0.9	» カートに入れる

96ウェル プラスミド精製キット

キット構成品

プロトコール

性能

Performance— BAC DNA

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