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96-well Plasmid and BAC Preparation Kit

Montage Plasmid Miniprep96 Kit

Montage Plasmid Miniprep96 Kit 是一种快速、易于使用的可制备少量高纯度质粒试剂盒。 由于采用了拥有专利的分离技术,这种 Montage 试剂盒只需一个简便的实验方案,而无需冗长的吸附/洗脱和离心步骤,只需不到传统方法 50% 的时间即可获得高纯度的质粒DNA,而且具有很好的重现性。

试剂盒包括 96 孔质粒 DNA 纯化所需的所有试剂和材料。 细菌裂解之后,只需三步简单的过滤,即可从每块板制备 96 个纯化 DNA 样品。 纯化样品适用于最灵敏的下游应用,包括克隆、DNA 测序、转化及其它应用。

Montage Plasmid Miniprep96 Kit 适用于自动化液体操作系统。 可从板上收集纯化样品且无需进行离心处理,扩大了试剂盒适用的自动化系统范围。


       • 不需要离心或沉淀步骤
       • 最短的处理时间
       • 极好的纯度、产出量和可重复性
       • 自动化兼容

试剂盒组成

部件功能
96 孔深孔培养板宿主菌的生长
质粒板质粒 DNA 的纯化
溶菌澄清板溶菌液的澄清
V 形底储存板质粒 DNA 样品的储存
密封带V 形底储存板的密封
RNase A溶液 1 所需的添加剂
溶液 1细胞再悬浮液
溶液 2细胞裂解液
溶液 3中和液
溶液 4洗涤液
溶液 5再悬浮液/质粒 DNA 的储存
Foil sealSealing plates during growth (must be pierced)
有关试剂盒组件的相关信息,请参阅 Montage Plasmid Miniprep96 Kit 操作手册,或访问:www.millipore.com/montage。

实验方案

For BAC DNA protocol, see Montage Plasmid MiniprepHTS Kit user guide, P36315

MB4790-41[465-ZH].jpg
1.细菌裂解之后,将裂解液从深孔细胞培养板转移至澄清板。 将裂解液抽真空通过澄清板转移至质粒滤膜板。
2.将质粒板移至真空多联支架上,真空抽滤 5 到 7 分钟以浓缩样品。 质粒 DNA 会保留在滤膜表面,而杂质会透过膜被排放掉。 加入清洗液,再过滤 3 到 5 分钟。
3.加入再悬浮缓冲液,将纯化样品吸出收集。
4.将样品转移至 V 形底滤膜板进行使用或储存。

性能

高质量

MB4791-71[1125-ALL].jpg

使用 Montage Plasmid Miniprep96 Kit(分子量标记 - λ Hind III 酶切物)纯化的质粒 DNA 的琼脂糖凝胶图谱质量和重复性都很好。

高产量*
宿主菌质粒产出量 (µg)
XL 1-bluepUC192.1 – 6.1
pLH2**3.5 – 9.2
JM109pUC19 2.4 – 6.4
pLH2**3.5 – 9.1
*结果取决于宿主菌、质粒和实验方案条件。
**pLH2 由 pUC19 衍生而来。 将 Hind III 酶切的 l 噬菌体的 2.0Kb 片段克隆至 pUC19 的 Hind III 位点,得到一个 4.7Kb 质粒。
结果可靠
宿主菌质粒 平均图谱
长度(n=24;
准确度大于 98%)
平均 Phred
q >20 bases
(n = 24)
XL1-bluepUC19 707618
pLH2658623
JM109pUC19 706602
pLH2695543
序列数据来自使用 Montage Plasmid Miniprep96 Kit 制备的质粒。
所有样品使用 BigDye 测序反应进行测序,并在 MegaBACE® 毛细管阵列测序仪上进行分析。 使用 160ng 的 pLH2 和 100ng 的 pUC19 分别进行反应。 反应物用 Montage SEQ384 Kit 纯化。

Performance— BAC DNA

High Speed and High Performance
Prep Time56 minutes
Average Yield (µg/well)0.86 (± 0.28)
Average Phred 20 bases411 (± 152)
Pass Rate (% wells with >100 Phred 20 bases)90
Data were generated with 96 BAC clones (human chromosome 22 library, plate #4, Research Genetics, Inc.). BAC DNA was isolated from the 96 clones with the Montage Plasmid MiniprepHTS 96 Kit. Prep time starts with pelleted bacterial cells prior to lysis, and includes DNA resuspension time. DNA yield was measured in a fluorometric assay using SYBR® green I nucleic acid stain (Molecular Probes, Inc.). The DNA preps were sequenced using an optimized BigDye® version 3.0 (Applied Biosystems, Inc.) sequencing reaction setup and cycling conditions. Sequencing reactions were cleaned on Montage SEQ384 plates prior to injection on the ABI 3700 DNA sequencer. Pass rate is defined as the percentage of the 96 clones that yielded at least 100 Phred 20 bases.
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BAC DNA purified with the Montage Plasmid MiniprepHTS 96 Kit was dissolved in 35 µL of the kit's Resuspension Buffer (solution 5) and 10 µL of the DNA were used for sequencing in a BigDye version 3.0 sequencing reaction (3/8 scale) as described in the kit's optimized protocol. The sequencing reaction was cleaned up using Montage SEQ384 plate and injected onto the ABI 3700 capillary sequencer.

Chromosomal DNA

MB4824-71[1138-ZH].jpg

DNA from three different BAC clones from a human chromosome 22 human BAC DNA library (Research Genetics, Inc.) was purified with the Montage Plasmid MiniprepHTS 96 Kit and electrophoresed on a 0.8% agarose gel for 120 min at 100 V either uncut (lanes 1 – 3) or after digestion with Not I (lanes 4 – 6) or Hind III (lanes 7 – 9). Lane M is a Hind III digest of Lambda phage DNA. The BAC DNA purified with the Montage Plasmid MiniprepHTS 96 Kit is suitable for fingerprinting.


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SCGVU01RE Stericup-GV,0.22 µm,PVDF,150 mL,射线灭菌 12 » 添加到购物车
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MSVMHTS00 MultiScreenHTS 真空多联装置 1 » 添加到购物车
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LSKCRS500 细胞重悬溶液 0.5 L 500 » 添加到购物车
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