Purificazione delle reazioni di sequenza

Kit di purificazione Montage SEQ₉₆ e piastre MultiScreen SEQ₃₈₄

Kit Montage SEQ₉₆ per la purificazione delle reazioni di sequenza

Mediante filtrazione su membrana ad esclusione dimensionale, queste piastre consentono di ottenere sequenze di alta qualità

   • Il protocollo richiede l'impiego del vuoto e dura 10 minuti
   • Compatibili con un gran numero di templati di DNA
   • Ottimizzati per l'impiego con i terminatori BigDye
   • Disponibili nel formato a 96 e 384 pozzetti
   • Automatizzabili

Protocollo veloce con l'impiego del vuoto

Per ottenere reazioni di sequenza ad elevata purezza, le piastre SEQ Millipore incorporano una membrana brevettata ad esclusione dimensionale. Oltre ad evitare l'uso della centrifuga, le piastre non richiedono la raccolta del filtrato o l'impaccamento delle colonne.

Il protocollo che si basa sull'impiego del vuoto è stato ideato per l'impiego con i sequenziatori di DNA automatizzati, compresi i sistemi ABI PRISM® e MegaBACE^® Amersham Biosciences.

Maggiore riproducibilità

La purificazione mediante esclusione dimensionale elimina la variabilità che solitamente caratterizza la purificazione delle reazioni di sequenza. Poiché il protocollo che impiega la filtrazione su membrana non prevede la precipitazione con alcol, non c'é il rischio che i sali o l'etanolo influiscano sui risultati finali del sequenziamento. Oltre ad elevati tassi di successo, con PCR e con templati di DNA plasmidico preparati in svariati modi, si ottengono risultati altamente riproducibili.

Protocollo

1.	Introdurre i campioni nei pozzetti.
2.	Filtrare per 6 minuti o fino a portare i pozzetti a secco, utilizzando il supporto da vuoto Montage. Il DNA sarà trattenuto sulla superficie della membrana, mentre sali e terminatori fluorescenti saranno eliminati con la filtrazione.
3.	Lavare, risospendere e recuperare il DNA dall'alto.

Prestazioni

Kit Montage SEQ₉₆: purificazione di reazione di sequenza ottenuta da templato di PCR

Un prodotto di PCR di 657 pb (10 fmoli) è stato purificato con una piastra Montage PCR_µ96 e sequenziato con una reazione 1/8 x BigDye Terminator v 1.1. Dopo essere stati purificati con il kit Montage SEQ₉₆, i campioni sono stati analizzati su un sequenziatore ABI PRISM 3700. Con questo approccio, la prima base dopo il primer è facilmente riconoscibile.

Protocolli più veloci, risultati migliori
Metodo	Tempo richiesto	Valori tipici di Phred 20	Tasso di successo medio
Kit Montage SEQ96	10 minuti	680	>97
Sistema per la rimozione dei terminatori fluorescenti basato sulla gel-filtrazione a 96 pozzetti, marchio Q*	55 minuti	630	94
*Con il protocollo consigliato dal produttore

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