Purification des produits de réactions de séquençage

Kit Montage SEQ₉₆ Cleanup et plaque de filtration MultiScreen SEQ₃₈₄

Kit Montage SEQ₉₆ Sequencing Reaction Cleanup

Les plaques de filtration utilisant une membrane de filtration par exclusion de taille donnent des séquences de qualité

   • Protocole d'une durée de 10 minutes, en utilisation sous vide
   • Compatibles avec une large gamme de matrices ADN
   • Optimisées pour une utilisation avec la chimie BigDye
   • Disponibles dans les formats 96 et 384 puits
   • Automatisables

Protocole rapide, en utilisation sous vide

Les plaques de filtration SEQ de Millipore intègrent la technologie brevetée de filtration par exclusion de taille et permettent d'obtenir des produits de réaction de séquençage hautement purifiés. En plus d'éliminer les étapes de centrifugation, les plaques ne requièrent aucune récupération de filtrat ni aucune préparation de colonnes.

Le protocole fonctionnant sous vide a été conçu pour une utilisation avec les séquenceurs automatisés d'ADN, à savoir les systèmes ABI PRISM^® et MegaBACE^® d'Amersham Biosciences.

Uniformité améliorée

La technologie d'exclusion de taille élimine la variabilité lors de la purification des produits de séquençage. En utilisant une membrane, le protocole élimine ainsi l'étape de précipitation à l'alcool. Il n'y a donc plus aucun risque que des sels ou de l'éthanol affectent la qualité de la séquence. En plus d'indices de qualité élevés, des résultats fort reproductibles sont obtenus avec les matrices PCR et plasmidiques préparées selon diverses méthodes.

Protocole

1.	Introduisez les échantillons dans les puits.
2.	Filtrez en utilisant le support Montage, de filtration sous vide, pendant 6 minutes ou jusqu'à ce que les puits soient secs. L'ADN est retenu à la surface de la membrane alors que les sels et les Dye terminators s'éliminent par filtration.
3.	Lavez, remettez en suspension et récupérez l'ADN.

Performances

Kit Montage SEQ₉₆ Sequencing Reaction Cleanup avec matrice PCR

Un produit de PCR de 657 bp (10 fmol) a été purifié à l'aide de la plaque de filtration Montage PCR_µ96 et séquencé grâce à une réaction 1/8 x BigDye Terminator v1.1. Après purification à l'aide du kit Montage SEQ₉₆ Sequencing Reaction Cleanup, les échantillons ont été analysés sur un séquenceur d'ADN ABI PRISM 3700. Avec cette approche, la première base après l'amorce est facilement détectable.

Protocoles plus rapides, résultats améliorés
Méthode	Durée du traitement	Valeurs Phred 20 typiques	Indice de qualité moyen
Kit Montage SEQ96	10 minutes	680	> 97
Concurrent Q, Système d'élimination des Dye terminators par séparation sur gel*, 96 puits	55 minutes	630	94
*Protocole recommandé par le fabricant

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