DNA-Extraktion aus Agarose-Gelen

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Montage Gel-Extraktions-Kit

Sie erzielen eine Rückgewinnung von 100 bis 10.000 bp DNA aus Agarose-Gelstücken in einem einzigen, 10-minütigen Zentrifugationsschritt. Das Kit besteht aus einer vormontierten Filtereinheit mit einem Agararose-Gel-Nebulizer, einem Mikrozentrifugenröhrchen und einem modifizierten TAE-Gel-Extraktionspuffer (trocken).

Die Einheit verwendet die Gelkompression zur Extraktion von DNA aus Agarose. Die Zentrifugalkraft bricht die Gelstruktur, treibt die Agarose durch eine kleine Düse in den Gel-Nebulizer, und die dabei entstehende Gelsuspension wird in das Probenreservoir gesprüht.

Die so präparierte DNA erfordert für die meisten Anwendungen keine weitere Aufreinigung , einschließlich Klonierung und radioisotopischer oder fluoreszenter DNA-Sequenzierung. Da die Agarose-Gel-Elektrophorese über eine große Auflösungsstärke verfügt, werden kleine und große nicht-spezifische Vervielfältigungsprodukte, die häufig die Klonierung und Sequenzierung nach PCR stören, vollständig aus dem Produkt entfernt.

Protokoll

1.	Nach routinemäßiger elektrophori scher Analyse von PCR-Produkten oder anderer DNA durch ein Agarose-Gel wird das gewünschte Gelstück ausgeschnitten.
2.	Das Gelstück in die vormontierte Einheit geben. Anmerkung: Das Protokoll ist nicht mit Agarose mit niedrigem Schmelzpunkt (Low Melting Agarose) kompatibel.
3.	10 Minuten lang bei 5.000 x g zur Extraktion der Gelsuspension in das Probenreservoir zentrifugieren.
4.	Nach Wegwerfen des Proben reservoirs und des Gel-Nebulizers besteht die Möglichkeit, die DNA in dem mit Deckel verschlossenen Filtratsröhrchen aufzubewahren.

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Typische DNA-Rückgewinnungen aus Agarose-Gelen.
DNA-Größe (bp)	DNA-Rückgewinnungen in Prozent
100	78
700	71
1000	77
2027	47
4361	35
9416	32
23130	29

Sequenzier-Ergebnisse

Automatisierte Ergebnisse fluoreszenter Sequenzierung für ein mit einer Montage Gel-Extraktions-Einheit aufgereinigtes pUC18-Gelfragment. Ein ABI PRISM^® Dye Terminator Sequencing Ready Reaction Kit mit AmpliTaq DNA-Polymerase (Applied Biosystems) wurde zur Erzeugung der Sequenzier-Ergebnisse verwendet. Sequenzier-Ergebnisse mit freundlicher Genehmigung von Jeff McConnell, Direktor der Genomik-Abteilung, Cleveland Genomics, Cleveland, Ohio, USA.

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Vergleichen	Bestellnummer	Beschreibung	St./Pkg.	Komponenten
	LSKGEL050	Montage Gel Extraktions-Kit	50	Bestehend aus: 50 Ultrafree-DA Filtereinheiten und 500 ml von 50 x konzentriertem modifiziertem TAE-Puffer	» In die Bestellung aufnehmen
	42600	Ultrafree-DA Zentrifugen-Filtereinheit	50		» In die Bestellung aufnehmen

Reagenz

Vergleichen	Bestellnummer	Beschreibung	St./Pkg.
	LSKMTAE50	500 ml von 50 x konzentriertem, modifiziertem TAE-Puffer	1	» In die Bestellung aufnehmen

Erforderliche Ausstattung: Zentrifuge mit variabler Geschwindigkeit