Purificación de la reacción de secuenciación

Kit de purificación Montage SEQ₉₆ y placa de filtración MultiScreen SEQ₃₈₄

Kit Montage SEQ₉₆ para purificación de la reacción de secuenciación

Las placas de filtración por exclusión de tamaño basadas en membranas, ofrecen resultados de secuenciación de calidad

   • Protocolo de 10 minutos basado en filtración por vacío
   • Compatible con diferentes "templates"
   • Optimizado para usarse con las químicas BigDye
   • Formatos de 96 y 384 pocillos disponibles
   • Compatible con automatización

Protocolo rápido, basado en filtración por vacío

Las placas de filtración SEQ de Millipore incorporan la tecnología patentada de exclusión por tamaño para obtener productos de la reacción de secuenciación altamente purificados. Además de eliminar los pasos de centrifugación, no es necesario recoger el filtrado de las placas ni cargar las columnas.

El protocolo, basado en el uso de vacío, está diseñado para utilizarse con secuenciadores automáticos de ADN, incluyendo los sistemas ABI PRISM® y Amersham Biosciences MegaBACE®.

Mayor uniformidad

La purificación por exclusión de tamaño elimina la variabilidad en la purificación de la reacción de secuenciación. Puesto que el protocolo basado en membrana no requiere la precipitación con alcohol, no hay riesgo de que las sales o el etanol afecten a los resultados finales de secuenciación. Además de ofrecer velocidades de filtración altas, se obtienen resultados altamente reproducibles con productos de PCR y plásmidos preparados por diferentes métodos.

Protocolo

1.	Introducir las muestras en los pocillos.
2.	Filtrar con el colector de vacío Montage durante 6 minutos o hasta que los pocillos estén vacíos. El ADN queda retenido en la superficie de la membrana mientras que las sales y los terminadores se filtran y eliminan.
3.	Lavar, resuspender y recuperar el ADN.

Rendimiento

Kit Montage SEQ₉₆ para purificación de la reacción de secuenciación con producto de PCR

Un producto de PCR de 657 pb (10 fmoles) se purificó usando la placa de filtración Montage PCR_µ96 y se secuenció en una reacción 1/8 x BigDye Terminator v1.1. Después de la purificación con el kit Montage SEQ₉₆ para purificación de la reacción de secuenciación, las muestras se analizaron en el secuenciador de ADN ABI PRISM 3700. Usando este método, la primera base después del "primer" es fácilmente detectable.

Protocolos más rápidos, mejores resultados
Método	Tiempo del proceso	Valores típicos Phred 20	"Pass rate" media
Kit Montage SEQ96	10 minutos	680	>97
Sistema "Marca Q" de eliminación de terminadores basado en la filtración en gel de 96 pocillos*	55 minutos	630	94
*Protocolo recomendado por el fabricante

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