日本凍結保存HepaRG™細胞
HepaRG™細胞は、トランスポーターや薬物代謝酵素の活性を再現性よく発現する最終分化したヒト肝細胞癌細胞です。 初代ヒ ト肝細胞と機能的に同等で、候補薬物の取込み、代謝ならびに動態の研究を促進します。 メルクミリポアは、最高品質基準にてBiopredicで製造されている HepaRG™細胞のサプライヤーです。
利点：品質、利便性、価値
- 幅広いアプリケーションで初代ヒト肝細胞のような反応と機能
- 日々の培地交換が不要、再現可能、必要な時期まで保存可能
- ヒト初代肝細胞と比べて総体的に低いコストで多種多様な研究に使用可能
信頼性の高いヒト肝細胞の代替
ヒト肝細胞は、in vitroの薬物代謝や毒性研究において、極めて重要であるとみなされます。 新鮮なヒト肝細胞の供給は予
測が不可能で、遺伝的変異性や環境変動性に左右され、高額な費用がかかり、品質が良くないことがよくあります。 さらに代替としては、ラット肝細胞、組換え非ヒト細胞株や
非肝細胞株そして凍結保存ヒト肝細胞がありますが、これらはすべて新鮮なヒト肝細胞の機能的活性を失っているため、代替として理想的であるとは言えません。
HepaRG™細胞はそのため、肝毒性や代謝の再現可能な研究にとって、革新的で実際的なソリューションです。
- 凍結保存HepaRG™細胞
≥8 x 106の生細胞を含む1mLのバイアル
1つのバイアルは、96ウェルプレート
1枚（72,000細胞／ウェル）あるいは24ウェルプレートの16ウェル（480,000細胞／ウェル）に完全に播種できます。
- HepaRG™ Thawing/Plating Medium Supplement
12.5 mL
基本培地100mLと混ぜ合わせると、4つのバイアルを溶解、4つのプレートに播種が可能
- HepaRG™ Tox Medium Supplement
12.5 mL
基本培地100mLと混ぜ合わせると、10回の培地交換が可能
- HepaRG™ Induction Medium Supplement
2.6 mL
基本培地100mLと混ぜ合わせると、誘導研究用に10回の培地交換が可能
- HepaRG™ Serum Free Induction Medium Supplement
0.6 mL
基本培地100mLと混ぜ合わせると、誘導研究用に10回の培地交換が可能
- HepaRG™ Culture Medium Supplement
14.0 mL
基本培地100mLと混ぜ合わると、細胞の寿命の延長や代謝機能の向上が必要な研究用に12回の培
地交換が可能
| HepaRG™ 細胞のアプリケーション | ||
| シトクロムP450遺伝子型データ | バリデーション済みTagMan識別アッセイ（ABI PRISM 7000 Sequence Detection System, Applied Biosystems）を使ってLimoges Hospital（フランス）のN. Picardとのコラボレーションにより取得 | |
| SNP説明 SNP：単一ヌクレオチド多型 ｗｔ：野生型 Mut：変異 **: wt = G T = minor allele in Caucasians |
CYP2D6 | |
| - | *2 (2850C>T) | *2/wt |
| - | *3 (2549delA) | wt/wt |
| - | *4 (1846G>A) | wt/wt |
| - | *7 (2935A>C) | wt/wt |
| - | *10 (100C>T) | wt/wt |
| - | CYP3A4 | |
| - | *1B (392G>A) | wt/wt |
| - | OATP1B1 (=OATP2) | |
| - | *5 (521T>C) | wt/*5 |
| - | OATP1B3 (=OATP8) | |
| - | 334T>C | wt/wt** |
| - | MRP2 | |
| - | -24C>T | wt/wt |
| - | 1249G>A | wt/mut |
| - | 3972C>T | wt/mut |
| フェーズIの依存性活性のVmax値（nmole/h/million cells） | |||
| 活性 | 酵素 | 方法 | 仕様* |
| フェナセチンO-デエチラーゼ活性 | CYP1A2 | 凍結したあと、細胞は試験化合物とともに、37°Cで1時間浮遊培養されました。 - フェナセチン(200 μM) - ミダ ゾラム(50 μM) - ブプロピオン(100 μM) - デキストロメトルファン(100 μM) 形成された代謝産物はLC-MS/MSで測定されました。 |
≥0.2 |
| ミダゾラム 1’ ヒドロキシラーゼ活性 | CYP3A4/5 | - | ≥1 |
| ブプロピオン ヒドロキシラーゼ活性 | CYP2B6 | - | ≥0.05 |
| デキストロメトルファン o デメチラーゼ活性 | CYP2D6 | - | ≥0.05 |
| *活性は、代謝産物/h/ million cellsのナノモルとして表しています。 代謝産物/ min/million cellsをピコモルに変換するには、結果に16.66を掛けます。 | |||
| 代謝活性の誘導 | ||||
| 誘導因子 | 酵素 | アッセイ | 方法 | 誘導倍率* 誘導倍率：試験済み細胞の活性／コントロール細胞の活性 仕様 |
| オメプラゾール、50 μM | CYP1A2 | フェナセチン O-dethylation | 解凍後、細胞は試験誘導因子とともに48時間培養されました。 そして細胞は試験物質とともに次のように培養されました。 -ミダゾラム(50 μM)とブプロピオン(100 μM)で2時間 -フェナセチン(200 μM)で5時間 代謝産物の構造は LC-MS/MSで測定されます。 |
≥1 |
| フェノバルビタール、1 μM | CYP2B6 | ブプロピオンヒドロキシル化 | - | ≥1 |
| リファンピシン、10 μM | CYP3A4/5 | ミダゾラム1’ ヒドロキシル化 | - | ≥1 |
| CYP1A2、CYP2B6、CYP3A4/5活性における誘導倍率は、バッファーコントロール細胞（非誘導）に対する特異的な代謝産物形成を 測定して決定されました。 | ||||
| 取り込みトランスポーター活性のVmax値 (pmole/ min/million cells) | |||
| 基質 | トランスポーター | 方法 | 仕様 |
| [3H] MPP+, 250 μM | OCT | 解凍後、細胞は基質とともに取り込み培地にて37°Cで3分間、浮遊培養しました。 取り込みトランスポーター活性（Vmax）は、液体シンチレーションカウンター で細胞結合型の放射活性として測定され、pmol/min/million cellsで表されます。 | ≥050 |
| [3H] タウロコール酸塩、25 μM | NTCP | - | ≥6 |
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