Estrazione di DNA da gel di agarosio

Kit Montage Gel Extraction

Consente di recuperare da 100 a 10.0000 pb da porzioni di gel d'agarosio con soli 10 minuti di centrifugazione. Il kit comprende dispositivi filtranti preassemblati completi di nebulizzatore del gel d'agarosio, provette da microcentrifuga e tampone TAE modificato per l'estrazione dal gel (da ricostituire).

Per estrarre il DNA, questi dispositivi utilizzano la compressione del gel di agarosio. La forza centrifuga determina il collasso della struttura del gel e spinge l'agarosio attraverso un piccolo orifizio del nebulizzatore, generando una sospensione semiliquida che viene, quindi, nebulizzata nell'unità filtrante.

Il DNA così ottenuto non richiede ulteriori fasi di purifcazione per la maggior parte delle applicazioni, tra cui clonazione e sequenziamento con marcatura radioattiva o fluorescente. Poiché l'elettroforesi su gel di agarosio presenta un elevato potere di risoluzione, i prodotti di amplificazione non specifici di piccole e grandi dimensioni, che frequentemente interferiscono con la clonazione ed il sequenziamento successivi alla PCR, vengono completamente rimossi.

   • Tempi di manipolazione minimi
   • 10 minuti di centrifugazione
   • DNA pienamente funzionale

Protocollo

Prestazioni (tornare in alto alla pagina)

Risultati del sequenziamento

Risultati del sequenziamento automatizzato con marcatura fluorescente per un plasmide pUC18 estratto da un frammento di gel con il kit Montage Gel Extraction. Il sequenziamento è stato realizzato utilizzando il kit ABI PRISM^® Dye Terminator Sequencing Ready Reaction e la DNA polimerasi AmpliTaq (Applied Biosystems). Risultati cortesemente offerti da Jeff McConnell, Director of Genomic Services, Cleveland Genomics, Cleveland, Ohio.