Enzyme-Free Cell Dissociation Solution
Enzyme-free Cell Dissociation Solution（非酵素系細胞分離溶液）は、キレート剤および細胞でキレート剤の作用を安定化させる物質を含むPBSまたはHank's液を基剤とした調製品です。0.5 mM EDTAよりもより急速に作用します。実際、ほとんどの細胞でトリプシンと同様の速さで作用します。最も重要なことは、細胞表面タンパク質の構造的、機能的完全性を維持し、0.5 mM EDTAを使用する場合に時々見られるような細胞毒性はありません。初代細胞や組織、腫瘍細胞の分離に利用可能であり、播種効率が向上します。
非酵素系細胞分離溶液を使用する場合、細胞はサブコンフルエント（60～80%）の状態でなければなりません。細胞が80%より高いコンフルエントの状態にある場合には、細胞をトリプシン処理してから30～40%のコンフルエントとなるよう播種し、24時間後に非酵素系細胞分離溶液を使用することをお勧めします（このようにすれば60～80%のコンフルエントの状態で酵素を用いない細胞分離ができるようになります）。
Enzyme-free Cell Dissolution Solution; Hank's Based
| Component | Grams/Liter |
| Potassium Chloride | 0.200 |
| Potassium Phosphate Monobasic | 0.200 |
| Sodium Chloride | 8.000 |
| Sodium Phosphate Dibasic | 1.150 |
| EDTA | Proprietary |
| Glycerol | Proprietary |
| Sodium Citrate | Proprietary |
Enzyme-free Cell Dissolution Solution, PBS Based
| Component | Grams/Liter |
| Potassium Chloride | 0.400 |
| Potassium Phosphate Monobasic | 0.060 |
| Sodium Bicarbonate | 0.350 |
| Sodium Chloride | 8.00 |
| Sodium Phosphate Dibasic | 0.048 |
| D-Glucose | 1.000 |
| EDTA | Proprietary |
| Glycerol | Proprietary |
| Sodium Citrate | Proprietary |
規格
- 保存方法： 室温または4 °Cで保存可能です。有効使用期限は2年間です。
- 滅菌性： 本製品は滅菌状態でお届けします。
- 使用： 本製品は研究用です。ヒトに使用したりin vivoでの使用はできません。in vitro診断用としても使用できません。
NIH 3T3 細胞にラットセロトニン 5HT1c cDNA発現プロモータとして作用するマウス白血病ウィルスロングターミナルリピート、およびネオマイシンリン酸転移酵素をコードする独立した発現カセットを有する発現ベクター(pMV7)でトランスフェクションしました。細胞を Enzyme-free Cell Dissociation Solutionで分離し、Ca++指示薬 Indo-1を添加しました。5HT1c受容体の活性化により細胞内 Ca++ 濃度が上昇します。細胞内の遊離の Ca++レベルの変化をフローサイトメーターでモニターしました。リガンド結合性とセカンドメッセンジャー活性化機能は完全に維持されており、5HT1cの特異的応答であることが認められます。 |
HELA細胞にヒト CD4をコードする cDNAを含む発現ベクター （pMV7、上記参照）でトランスフェクションしました。細胞をEnzyme-free Cell Dissociation Solutionで分離し、CD4またはCD8モノクローナル抗体を加えてインキュベーションしました。次に細胞を洗ってから FITC結合二次抗体を加えてインキュベーションしました。細胞表面に発現された CD4タンパク質は抗-CD4抗体により特異的に検出され、抗 CD8抗体や二次抗体のみでは検出されませんでした。以上の実験から、Enzyme-free Cell Dissociation Solutionにより分離したトランスフェクション後のHELA細胞では、細胞表面に発現された CD4タンパク質の抗原性および構造的な完全性が維持されていることが認められます。 |
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