培養細胞凍結保存用培地

様々な株化細胞の生存率を決定づけます

細胞はすべて、Specialty Mediaの培養細胞凍結保存用培地プロトコールに従って凍結融解しました。細胞は液体窒素中で保存し、37 ℃の循環ウォーターバスで急速融解、完全培地で希釈、4 ℃で5分間1000rpmでペレット化、これを完全培地に再懸濁してから、適切な大きさの培養容器に播種しました。

細胞生存率は以下の方法で決定しました。融解し播種してから16時間後に、浮遊性培養細胞をペレット化し、トリパンブルー溶液で希釈し、ヘモサイトメータで計数してトリパンブルー陽性細胞と陰性細胞を計測しました。この合計値を凍結した細胞の総数と比較し、生存率（%）を計算しました。付着性細胞の場合は16時間プレートで培養し、培地を採集して遠心分離によりプレートに接着していない「遊離細胞」を集めました。付着性細胞を剥離し、完全培地に再懸濁してから穏やかにペレット化しました。「遊離細胞｣ペレットと付着性細胞のペレットをトリパンブルー溶液に再懸濁して合わせました。浮遊性細胞の場合と同様に細胞をヘモサイトメータで計数し生存率（%）を決定しました。

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