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SNAP i.d.吸引式免疫反応システム

SNAP i.d.の吸引ろ過による試薬移送のメリット
  • ブロッティングメンブレンを通して試薬を吸引します。
  • オーバーブロッキングを最小限に抑えます。
  • メンブレンを単にすすぐのではなく、徹底的に洗い流します。
  • インキュベーション時間を短縮できます。


弊社が独自に開発したブロットホルダーと試薬を積極的にメンブレンろ過するプロセスによって、メンブレンの孔を十分にブロック、洗浄します。
SNAP i.d.は低濃度のブロッキング剤を使用するので今までよりも良質の結果を得ることができます。

脱脂粉乳（NFDM）はウェスタンブロット法でよく使用されるブロッキング溶液ですが、ブロッキング性能が高いため、タンパク質シグナルが低下する可能性があります。

これを立証するため、ブロッティングと免疫検出の前に、ラット肝臓細胞溶解液の2倍希釈シリーズ（12μgレーン1から0.09μgレーン8まで）をSDS-PAGEで分離しました（一次抗体はマウス抗-GAPDH、二次抗体はHRP結合ヤギ抗マウスを使用）。
ブロットAでは従来の免疫検出プロトコール（5％脱脂粉乳で1時間のブロック、1/50,000希釈の一次抗体または二次抗体で1時間培養、培養後3回洗浄）を使用しました。
ブロットBとブロットCは、SNAP i.d.のブロットホルダーに取り付け、0.5%と0.05%の脱脂粉乳でそれぞれ20秒間ブロックしました。
ブロットを抗-GAPDH（1/13,000）で10分間培養後、すぐに洗浄して、HRPヤギ抗マウス（1/10,000）で10分間培養しました。
その結果、脱脂粉乳濃度が低い方が、検出感度が増加することがわかりました。


  
シグナルを改善！
SNAP i.d.は低濃度のブロッキング剤を使用するのでシグナルの質を改善できます。

脱脂粉乳（NFDM）はウェスタンブロット法でよく使用される効率のよいブロッキング溶液ですが、ブロッキング性能が高いため、タンパク質シグナルが低下する可能性があります。
これを立証するため、ブロッティングと免疫検出の前に、ラット肝臓細胞溶解液の2倍希釈シリーズ（12μgレーン1から0.09μgレーン8まで）をSDS-PAGEで分離しました（一次抗体はマウス抗-グリセルアルデヒド三リン酸脱水素酵素（GAPDH）、二次抗体はHRP結合ヤギ抗マウスを使用）。
ブロットAでは従来の免疫検出プロトコール（5％脱脂粉乳で1時間のブロック、1/40,000希釈の一次抗体または1/50,000希釈の二次抗体で1時間培養、培養後3回洗浄）を使用しました。

ブロットB、C、Dは、SNAP i.d.のブロットホルダーに取り付け、0.5%、0.1%、0.05%の脱脂粉乳でそれぞれ20秒間ブロックしました。
ブロットを抗-GAPDH（1/13,000）で10分間培養後、すぐに洗浄して、HRPヤギ抗マウス（1/10,000）で10分間培養しました。
その結果、脱脂粉乳濃度が低い方が、検出感度が増加することがわかりました。



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SNAP i.d.
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